Η ELISA (ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία) είναι μια πειραματική μέθοδος που χρησιμοποιείται συνήθως για την ανίχνευση και τον ποσοτικό προσδιορισμό πρωτεϊνών, ορμονών, αντισωμάτων και άλλων μορίων. Παρακάτω ερμηνεύουμε τη μέθοδο ELISA από τρεις πτυχές: βασικές αρχές, προσδιορισμός αποτελέσματος και προφυλάξεις:
1. Βασική αρχή: Η ELISA βασίζεται στην ειδική δέσμευση αντιγόνου-αντισώματος. Συνήθως, ένα γνωστό αντίσωμα ή αντιγόνο στερεώνεται σε μια μικροπλάκα και στη συνέχεια προστίθεται το προς εξέταση δείγμα. Εάν το δείγμα που θα ελεγχθεί περιέχει το αντίστοιχο αντίσωμα ή αντιγόνο, θα δεσμευτούν στο σταθερό μόριο. Στη συνέχεια, προσθέστε ένα δευτερεύον αντίσωμα επισημασμένο με ένα ένζυμο που έχει συγγένεια για την υπό δοκιμή ουσία. Τέλος, προσθέστε το υπόστρωμα του ενζύμου και εμφανίζεται μια χρωματική αντίδραση. Ανάλογα με το βάθος χρώματος ή την ένταση της φωταύγειας, η συγκέντρωση της υπό δοκιμή ουσίας μπορεί να προσδιοριστεί ποσοτικά ή ποιοτικά.
2. Προσδιορισμός αποτελέσματος: Ποιοτική ELISA: Απλώς προσδιορίστε εάν το μόριο-στόχος υπάρχει στο δείγμα. Εάν υπάρχει χρωματική αντίδραση, σημαίνει ότι υπάρχει η υπό δοκιμή ουσία. Ποσοτική ELISA: Προσδιορίστε ποσοτικά την ελεγχόμενη ουσία κατασκευάζοντας μια πρότυπη καμπύλη. Αρχικά, χρησιμοποιήστε μια τυπική ουσία με γνωστή συγκέντρωση για να πραγματοποιήσετε ELISA για να λάβετε μια σειρά από χρωματικές αντιδράσεις. Στη συνέχεια, σχεδιάστε μια τυπική καμπύλη με βάση αυτά τα σημεία δεδομένων. Η συγκέντρωση του δείγματος δοκιμής μπορεί να ληφθεί συγκρίνοντας την ένταση χρώματός του με την τυπική καμπύλη.
3. Προφυλάξεις: Η λειτουργία θα πρέπει να είναι τυποποιημένη για τη μείωση της διασταυρούμενης μόλυνσης και των σφαλμάτων. Βεβαιωθείτε ότι όλα τα αντιδραστήρια και ο εξοπλισμός είναι σε καλή κατάσταση. Η κατασκευή και ο προσδιορισμός της τυπικής καμπύλης θα πρέπει να είναι ακριβείς για να διασφαλίζεται η ακριβής συγκέντρωση του δείγματος δοκιμής.